In vitro диагностика аутоиммунных заболеваний

Аутоиммунные заболевания (АИЗ) развиваются в тех случаях, когда в организме появляются антитела (АТ) или клоны Т клеток, направленные против собственных антигенов (АГ) организма. Аутоиммунные механизмы лежат в основе многих органоспецифичных и системных заболеваний.  К таким заболеваниям относятся ревматоидный артрит, инсулин-зависимый сахарный диабет, язвенный колит и другие менее известные заболевания. Возникший аутоиммунный процесс как правило хронический и приводит к долговременному повреждению тканей. В связи с этим определение присутствия и уровня антител имеет диагностическое, а иногда и прогностическое значение.

Следует отметить, что обнаружение аутоантител при том или ином заболевании указывает на три возможности:

1. Аутоантитела служат причиной патологического процесса;
2. Аутоантитела образуются вследствие повреждения тканей, вызванного тем или иным патологическим процессом (например, у лиц, перенесших инфаркт миокарда, в сыворотке могут присутствовать аутоантитела к антигенам сердечной мышцы);
3. Существует некоторый третий фактор, который лежит в основе и повреждения тканей и повреждения антител.

В большинстве случаев, однако, реализуется лишь первая возможность.

Что касается диагностики АИЗ, то в основном используются три метода: иммунофлюоресценция (ИФ), иммуноферментный анализ (ИФА) и иммуноблоттинг (ИБ).

Иммунофлюоресценция бывает двух видов – прямая (ПИФ) и непрямая (НИФ). Принцип ПИФ заключается в том, что на срез ткани наносят раствор АТ, меченных флуоресцентным красителем. При этом АТ и АГ образуют комплексы, которые затем могут быть обнаружены в УФ-свете. Использование техники НИФ подразумевает использование немеченых АТ, раствор которых наносится на срез ткани, а затем выявляют комплекс АГ+АТ с помощью меченных флюорохромом антииммуноглобулиновых антител (в конечном итоге образуется комплекс АГ+АТ+антиIgАТ).

ПИФ используется в диагностике такого аутоиммунного заболевания как системная красная волчанка (КСВ). Тест волчаночной полоски позволяет обнаружить иммуноглобулины и факторы комплемента в дермоэпидермальном соединении биоптатов кожи. НИФ применяется для целого ряда ревматических заболеваний. Например, определение антинуклеарных антител (АНА) является весьма надежным диагностическим критерием для ряда аутоиммунных ревматических заболеваний: системной красной волчанки, системной склеродермии и др.

Рис. 1 Схема ИФА

ИФА - метод выявления антигенов с помощью соответствующих им антител, конъюгированных с ферментом-меткой (пероксидазой хрена, бета-галактозидазой, щелочной фосфатазой)

Метод ИФА состоит из 3х основных этапов:

• Образование иммунного комплекса «антиген (исследуемое вещество) – специфическое к нему антитело» или наоборот;
• Формирование связи конъюгата с образовавшимся на предыдущем этапе иммунным комплексом или со свободными местами связывания (детерминантами);
• Преобразование субстрата под действием ферментной метки в регистрируемый сигнал в результате биохимической реакции;

ИФА используется, например, при диагностике витилиго. Данный метод позволяет выделять маркерные ауто-АТ класса IgG определенной антигенной специфичности. В ходе одного исследования, проведенного в России на больных без других сопутствующих патологий, было выявлено, что у 84% пациентов организм вырабатывает аутоантитела против различных систем органов. Интересно, что у 44% пациентов были обнаружены ауто-АТ к белкам S100. Такой результат может служить подтверждением гипотезы о том, что одним из провоцирующих витилиго факторов является стресс.

Иммуноблоттинг – один из самых современных методов, получивший широкое распространение. ИБ считается высокоспецифичным и высокочувствительным методом, поэтому его используют в том числе для пациентов с неопределенными результатами анализов. Иммуноблоттинг сочетает в себе несколько методов анализа. Сначала АГ разделяют методом электрофореза в геле. Полученные фракции переносят на лист нитроцеллюлозы (блот), помещенный в специальную камеру. Затем блоты обрабатывают АТ к специфичному АГ и добавляют радиоактивно меченный конъюгат для определения связывания АТ+АГ. Затем блот отмывают и помещают в кассету с рентгеновской пленкой для проявления комплексов. Иммуноблоттинг применяется для диагностики аутоиммунных заболеваний печени и других патологий.

1. ФС.1.7.2.0033.15 Метод иммуноферментного анализа
2. Александрова Елена Николаевна, Верижникова Ж. Г., Новиков А. А., Баранов А. А., Абайтова Н. Е., Лапкина Н. А., Роггенбук Д., Насонов Е. Л. Автоматизированный анализ антинуклеарных антител методом непрямой реакции иммунофлюоресценции с использованием HEp-2-клеток // Клиническая лабораторная диагностика. №3.
3. Лила В.А., Мазуров В.И., Лапин С.В., Мазинг А.В., Мошникова А.Н. СОВРЕМЕННЫЕ ВОЗМОЖНОСТИ РАННЕЙ ДИАГНОСТИКИ СИСТЕМНОЙ КРАСНОЙ ВОЛЧАНКИ // Современная ревматология. №3.
4. Ломоносов Константин Михайлович, Симонова Нина Иммануиловна, Ломоносов Михаил Константинович Сравнительный анализ сывороточного содержания аутоантител у больных витилиго // Российский журнал кожных и венерических болезней. №2. Ройт А, Бростофф Дж., Мейл Д. -