ВЛИЯНИЕ ПОТЕНЦИАЛЬНО ИНТЕРФЕРИРУЮЩИХ ВЕЩЕСТВ НА РЕЗУЛЬТАТЫ КЛИНИЧЕСКИХ ЛАБОРАТОРНЫХ ИСПЫТАНИЙ

 На достоверность и точность результатов образцов в клинических лабораторных испытаниях влияет множество причин, таких как преаналитический фактор, взятие пробы, транспортировка, хранение образцов, а также наличие интерферирующих веществ в образцах биоматериала. Интерферирующие вещества являются одной их самых распространённых ошибок в клинических лабораторных измерениях. Наличие этих веществ в образцах приводит к искажению результатов измерений, а также ставит под угрозу жизнь и здоровье пациента.

Интерференция может быть вызвана наличием в пробе биоматериала как эндогенного, так и экзогенного вещества. К основным эндогенным интерферирующим факторам относят следующие: метаболиты, образующиеся при патологических состояниях, таких как сахарный диабет; множественная миелома; холестатический гепатит; гемолиз, т.е. разрушение эритроцитов с выходом в жидкую часть крови ряда внутриклеточных компонентов (гемоглобина, ЛДГ, калия, магния и др.), что изменяет истинные результаты определения концентрации/активности таких компонентов крови, как билирубин, липаза; липемия, которая изменяет результаты ряда колориметрических и нефелометрических методов исследования (особенно при исследовании фосфора, общего билирубина, мочевой кислоты, общего белка, электролитов). К экзогенным факторам относят: лекарственные средства и их метаболиты, парентеральное питание, плазма расширители, антикоагулянты; вещества, принимаемые пациентом, такие как алкоголь, наркотики, пищевые добавки и т.п.; вещества, добавленные во время приготовления образца, такие как антикоагулянты, консерванты, стабилизаторы. Интерферирующие вещества искажают результаты клинических лабораторных измерений с помощью следующих механизмов воздействия на аналитическую систему [1,3]:

  • Химическим артефактом, интерферент может подавить реакцию, конкурируя за реагенты или ингибируя реакции, также он может изменить форму аналита путем комплексообразования или осаждения;
  • Путем искажения измеряемых параметров интерферирующее вещество может иметь свойства, сходные с аналитом, такие как флуоресценция, цвет, рассеяние света, положение элюирования или отклик электрода, которые обнаруживаются и измеряются;
  • Физическим артефактом ‒ воздействие интерферирующего вещества может изменить физическое свойство матрицы образца, например, вязкость, поверхностное натяжение, мутность или ионная сила, вызывающие видимые изменения концентрации измеряемой величины;
  • Ингибированием ферментов, интерферент может изменить активность фермента (аналита или реагента) путем секвестированием металлических активаторов, связывание с каталитическим центром или окисление основных сульфгидрильных групп;
  • Механизмом проявления неспецифичности, интерферент может реагировать так же, как и аналит.
  • С помощью перекрестной реактивности: интерферент, сходный по структуре с антигеном, может перекрестно реагировать с антителом в иммунохимическом методе измерения;

В настоящее время международная организация CLSI предлагает только два метода оценки влияния потенциально интерферирующих веществ. По первой методике оценка производится добавлением потенциально интерферирующих веществ в образец биоматериала. Согласно данной методике, необходимо получить несколько образцов соответствующего биоматериала от здоровых людей, у которых отсутствует интересующий интерферент. Если подходящие свежие образцы отсутствуют, то возможно использование замороженных или лиофилизированных образцов. Отобранный биоматериал делят на две части: в первую часть добавляют раствор с высокой концентрацией интерферента, а во вторую ‒ растворитель, равный по объему с первым раствором. Для всех растворов определяют концентрацию мезюранда и проводят статистическую обработку полученных данных. Необходимо отметить, что для достижения точных результатов все образцы анализируются в одном цикле измерений, это требуется для того, чтобы избежать появление других переменных, таких как калибровка или измерение партии реагентов. Данная методика позволяет определить взаимосвязь между концентрацией интерферента и величиной помехи при любой концентрации интерферирующих веществ в пределах выбранного диапазона[1,2].

Вторая методика заключается в оценке смещения отдельных репрезентативных образцов пациентов по сравнению с высокоспецифичными. Она имеет низкую чувствительность к интерферирующим веществам, поэтому применяется для установления истинных значений влияния потенциально интерферирующих веществ. Метод основан на сравнительном анализе двух методик определения мезюранда: по эталонной методике, или другой процедуре, которая обладает высокой точностью и избирательностью, а также с помощью методики, используемой производителем. Анализ проводится с использованием двух групп образцов пациентов ‒ тестовая и контрольная. Образцы биоматериала тестовой группы пациентов должны содержать один или несколько потенциально интерферирующих веществ. Данная группа выбирается на основании диагнозов или методов лечения пациентов. Контрольные образцы отбираются у здоровых пациентов, в биоматериале которых отсутствует потенциально интерферирующие вещества. Пробы биоматериала, полученные от двух групп пациентов, должны охватывать один и тот же диапазон концентрации мезюранда.  Полученные пробы анализируют в двух повторах, используя каждую процедуру измерения. По результатам проводят статистическую обработку данных и строят точечный график сравнения двух исследуемых групп. Результаты тестовой группы пациентов сравниваются с данными контрольной группы и оцениваются на предмет наличия систематической разницы, в вариабельности результатов или увеличения числа экстремальных значений, для тестовой группы. Вещества, которые демонстрируют клинически значимый эффект, считаются интерферентами, для которых зачем оценивают взаимосвязь между концентрацией интерферента и степенью помех. Если клинически значимого эффекта не наблюдается, смещение, если таковое имеется, вызванное этим веществом, не имеет значения и дальнейшее тестирование не проводится. [2].

Таким образом, для достижения точных и верных результатов в клинических лабораторных испытаниях, необходимо подробное исследование каждого потенциально интерферирующего вещества, которое включает в себя исследование природы вещества, механизм воздействия на мезюранд и правильный подбор метода оценки влияния интерферента.

 Список использованной литературы

  1. 1. Interference Testing in Clinical Chemistry, 3rd Edition — EP07 Paperback – 2018, by NCCLS.
  2. 2. Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples; Approved Guideline—Second Edition. NCCLS document EP9-A2 (ISBN 1-56238-472-4). NCCLS, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pennsylvania 19087-1898 USA, 2002.
  3. 3. Analytical Interference More than Just a Laboratory Problem. Steven C. Kazmierczak, PhD, and Paul G. Catrou, MD, 2000 Jan;113(1):9-11.